Las técnicas espectrométricas se basan en la interacción
de las radiaciones electromagnéticas con la materia.
La radiación
electromagnética es una forma de energía radiante; se representa como un
campo eléctrico y otros magnéticos situados en fase y con oscilaciones
sinusoidales en ángulo recto un campo respecto al otro y, a
su vez, con la dirección de propagación; se propaga por lo
tanto en forma de ondas
Longitud de onda:
Se define como la
distancia entre los picos de onda esta distancia
se expresa, según el sistema internacional de unidades‘(SI)
(en nanómetros nm)
Frecuencia:
Es
el numero de oscilaciones (ciclo) que una partícula realiza
en una unidad de tiempo, generalmente un
segundo (ciclos por segundo) es la inversa de la longitud
de onda.
Las principales
técnicas espectrometrícas empleadas en la actualidad en los laboratorios de
bioquímica clínica son:
La espectrometría de
absorción molecular en el ultravioleta y en el visible
La fluorimetría
La turbidimetría
La nefelometría
La luminometría
La espectrometría de
absorción atómica
La espectrometría de
emisión atómica
La espectrometría
de emisión atómica
Es un método
de análisis químico que utiliza la intensidad de la luz emitida desde
una llama, plasma, arco o chispa en una longitud
de onda particular para determinar la cantidad de un elemento en una
muestra.
La longitud
de onda de la línea espectral atómica da la identidad del elemento,
mientras que la intensidad de la luz emitida es proporcional a la cantidad
de átomos del elemento
La
espectrometría de absorción molecular.
Se refiere a una
variedad de técnicas que emplean la interacción de la radiación
electromagnética con la materia.
En la
espectrometría de absorción, se compara la intensidad de un haz de luz medida
antes y después de la interacción con una muestra. Las palabras transmisión y
remisión se refieren a la dirección de viaje de los haces de luz medidos antes
y después de la absorción.
La ley de
Beer-Lambert
La ley de Beer-Lambert
relaciona la intensidad de luz entrante en un medio con la intensidad saliente
después de que en dicho medio se produzca absorción.
La ley explica que hay
una relación exponencial entre la transmisión de luz a través de una sustancia
y la concentración de la sustancia, así como también entre la transmisión y la
longitud del cuerpo que la luz atraviesa.
Espectrofotómetro
}Un espectrofotómetro
es un instrumento usado en el análisis químico que sirve para medir, en función
de la longitud de onda, la relación entre valores de una misma magnitud
fotométrica relativos a dos haces de radiaciones y la concentración o
reacciones químicas que se miden en una muestra.
También se utiliza
en laboratorios de química para la cuantificación de sustancias y
microorganismos.
Componentes de
un Espectrofotómetro
·
Fuente de luz
·
Monocromador
·
Compartimento de Muestra
·
Detector
·
Foto detectores
·
Celdas
Fluorimetria
Se le denomina Fluorimetria a
la emisión de radiación por electrones excitados de compuestos que previamente
han absorbido radiación y que de esta forma vuelven a su estado fundamental.
Las medidas de
fluorescencia se realizan, con instrumentos denominados fluorimetros, que
consta de:
·
Fuente de luz excitación.
·
Filtro o monocromador primario.
·
Cubeta con espécimen.
·
Detector.
·
registro
La Turbidimetría
y Nefelometría
Turbidimetría
Es un método en el que
se mide la disminución de la potencia de la radiación transmitida
debido a la dispersión. Se mide en un espectrofotómetro UV/Vis
Nefelometría
Es un método para medir
la intensidad de una radiación dispersa en un ángulo de 90 °C con respecto a
la fuente. Se mide en un espectrofluorímetro.
Para determinar la
concentración de analito en este método aplicamos.
La luminometría.
La luminometría es
una técnica utilizada para la determinación de un compuesto químico mediante la
cuantificación de energía lumínica que el mismo emite en determinadas
condiciones. Esta energía generalmente es emitida como luz visible o
UV.
La
espectrometría de absorción atómica.
Es un método
instrumental de la química analítica que permite medir las concentraciones
específicas de un material en una mezcla y determinar una gran variedad
de elementos.
Esta técnica se
utiliza para determinar la concentración de un elemento particular
(el analito) en una muestra y puede determinar más de 70 elementos
diferentes en solución o directamente en muestras sólidas utilizadas en
farmacología, biofísica o investigación toxicológica.
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